Эти способы позволяют избежать получения ложноотрицательных результатов, возможных при прямых методах, и помогают определить стадию и характер течения заболевания. Непрямой анализ рекомендуется для диагностики восходящей и персистирующей инфекции. Данные методы применяются и в случае затруднений при взятии материала для обнаружения антигена, особенно у детей.
В основе непрямых методов лежит выявление специфических антител, которые накапливаются в сыворотке крови и секрете инфицированного организма при иммунном ответе после внедрения возбудителя. Антитела относятся к трем классам иммуноглобулиновых (Ig) молекул: М, G, А. При первичном инфицировании сначала появляются антитела класса М, затем G и в последнюю очередь А. При угасании иммунного ответа снижение титра антител каждого из классов происходит в той же последовательности. При повторном проникновении возбудителя иммунный ответ характеризуется быстрым нарастанием титра антител классов G и А и полным отсутствием антител класса М.
При остром инфекционном процессе обнаруживаются антитела класса М или классов G и А быстро нарастающие либо снижающиеся титры антител. При хронически протекающих заболеваниях выявляются специфические антитела классов G и А, концентрации которых не изменяются на протяжении длительного времени.
Реакция связывания комплемента
РСК - метод, основанный на участии в реакции специфических хламидийных антигенов и антител, а также оттитрованного комплемента. При образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание комплемента (1-й этап), что выявляется на 2-м этапе с помощью бараньих эритроцитов и антисыворотки к ним. При положительном результате лизиса бараньих эритроцитов не происходит.
Достоинства метода:
- Не требует специального оборудования.
- Позволяет исследовать одновременно большое количество сывороток.
Недостатки и ограничения:
- Антитела могутобладать антикомплементарностью, т.е. способностью адсорбировать комплемент, что задерживает гемолиз и искажает результат.
- Метод требует дополнительного контроля качества антигенов, комплемента, бараньих эритроцитов.
- Результаты анализа учитываются визуально.
Реакция непрямой иммунофлюоресценции
РНИФ для обнаружения специфических антител осуществляется в два этапа. На 1-м этапе реакции образуется иммунный комплекс, на 2-м происходит выявление данного комплекса антиген-антитело с помощью видоспецифической иммунной сыворотки с флюорохромом. Учет полученных результатов проводится с помощью люминесцентного микроскопа.
Достоинства метода:
- Высокая чувствительность и специфичность.
- Возможность определения антител к возбудителю в небольшом количестве материала.
Недостатки и ограничения:
- Метод требует специального оснащения и соответствующей квалификации персонала.
- Субъективность оценки результатов.
Непрямое выявление хламидий (иммуноферментный анализ)
Метод основан на иммуноферментной реакции антиген-антитело с последующим окрашиванием конечного продукта и оценкой результата с помощью спектрофотометра. ИФА предназначен для выявления антихламидийных антител классов G, М, А в сыворотке крови. Острая фаза заболевания характеризуется выработкой IgM; его прогрессирование (переход острой стадии в хроническую) - появлением IgA. При реинфекции и реактивации имеет место скачкообразный подъем концентрации IgG, которая при отсутствии лечения не изменяется. У пациентов с бессимптомным течением болезни появляются единичные IgA с сохраняющимся низким уровнем в течение многих недель. Единичные постоянно низкие титры IgG указывают на перенесенную в прошлом хламидийную инфекцию. Достоверные результаты возможны только при определении всех трех классов антител.
Достоинства метода:
- Высокая чувствительность и специфичность.
- Простота постановки реакции.
- Возможность одновременного обследования большого числа людей.
- Объективная оценка результатов с помощью спектрофотометра.
- Выявление антител, относящихся к иммуноглобулинам разных классов.
- Возможность определения титра антител.
Другие методы серологического исследования
Специфические антитела можно определить иммунологическими методами. Наиболее информативные из них - микроиммунофлюоресценция и рекомбинантный липополисахаридный ИФА (r-ELISA). С помощью этих методов удается установить серологические критерии для определения характера и стадии заболеваний, вызванных хламидиями.
Микроиммунофлюоресценция основана на технологии ИФА на микрочастицах (МИФА) и предназначена для качественного определения липополисахаридного антигена Chlamydia trachomatis в исследуемом биологическом материале на анализаторе I тх. Тест-система Chlamydia-Antigen-ELISA является экономным, специфичным и чувствительным методом в рутинной диагностике хламидийной инфекции. В основу ее положен твердофазный ИФА. С помощью данной тест-системы возможно выявление антигенов хламидий. Визуально положительные пробы окрашиваются в желто-оранжевый цвет.
Тест-система p-ELISA (Германия) представляет собой иммуноферментные наборы для выявления антихламидийных антител классов G, А, М с определением их титра в сыворотке крови.
В заключение следует отметить, что в настоящее время нет лабораторного метода, который позволил бы полностью избежать получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Для выявления хламидиоза требуется комплексная лабораторная диагностика: ПИФ, ИФА, микробиологический метод, ПЦР. В совокупности эти методы позволяют выявить возбудитель, определить стадию заболевания, обосновать необходимость назначения антибактериальных средств.
=================
Вы читаете тему:
Современный алгоритм диагностики хламидийной инфекции
1. Chlamydia trachomatis и ее роль в заболеваниях урогенитального тракта.
2. Методы прямого выявления Chlamydia trachomatis.
3. Методы непрямого выявления Chlamydia trachomatis.
Смирнова Т. А., Покатович O. K. БГМУ.
Опубликовано: "Медицинская панорама" № 8, сентябрь 2004.