Исследование аллергенных свойств импланта из пористой оксидной керамики в эксперименте


Постоянное слезотечение при патологии слезоотводящих путей является не только косметическим недостатком, но также может стать причиной тяжелых осложнений со стороны глаза, а нередко, при остром гнойном воспалении слезного мешка, привести к тяжелым орбитальным и внутричерепным осложнениям. Несмотря на имеющиеся успехи в лечении заболеваний слезных органов, сложная и сочетанная патология слезоотводящих путей продолжает оставаться одной из самых трудных и в значительной степени нерешенных проблем.

Основным способом лечения данной патологии является хирургический метод, и чаще всего для достижения успеха используется комбинация нескольких методов. Тем не менее, по сообщению отдельных авторов, отрицательные результаты хирургического лечения больных со сложной и сочетанной патологией слезоотводящих путей составляют от 28 до 40%, а такие известные хирургические методы лечения, как дакриоцисториностомия, каналикулоцисториностомия и др., с использованием собственных тканей для пластики и реконструкции слезоотводящей путей, часто оказываются неэффективными.

Для реабилитации этой категории больных предложена лакориностомия с применением постоянного лакопротеза, для изготовления которого используются различные материалы: полихлорвинил, силикон, стекло, сивилен. Однако лакопротезы, изготовленные из силикона, стекла и сивилена, не прорастают окружающими биологическими тканями, ведут себя как инородные тела, поэтому вызывают рост грануляций, мигрируют, выпадают, что требует, в лучшем случае, повторных хирургических вмешательств для замены лакопротеза на новый, а в худшем — обрекает пациента на пожизненное слезостояние и слезотечение.

Обнадеживающие результаты применения в офтальмологии композиционного материала из пенокерамики для формирования опорно-двигательной культи при анофтальме определили характер наших дальнейших исследований. Представляется актуальным разработать лакопротез из новых материалов, сочетающих в себе ряд положительных качеств. С одной стороны, материал должен быть биологически инертным, иметь пористую структуру для врастания в него окружающих тканей и надежной фиксации импланта в заданном положении, а с другой — хорошо дренировать слезу. Наиболее подходящим материалом для этой цели, на наш взгляд, является алюмооксидная пенокерамика и силикон. Применение в клинической практике лакопротеза из нового материала для лечения больных со сложной патологией слезоотводящих путей сопряжено с определенным риском развития разного рода патологических реакций организма на имплант.

Для обоснования клинического применения лакопротезов из указанных материалов в хирургическом лечении больных с тяжелой патологией слезоотводящей системы нами проведен комплекс лабораторно-инструментальных исследований, включающих морфологические, биохимические, аллергологические и др. методы. Цель настоящей работы — оценить возможность применения в клинической практике лакопротеза, изготовленного из алюмооксидной пенокерамики, на основе исследования его аллергенных свойств.


Материал и методы исследования

Исследование возможного влияния имплантов, изготовленных из пористой алюмооксидной керамики, на иммунную систему экспериментальных животных осуществляли путем оценки жизнеспособности спленоцитов, формирования гиперчувствительности замедленного и немедленного типов с применением реакции торможения миграции лейкоцитов периферической крови и теста деструкции тучных клеток, проведенных с вытяжкой из импланта (антиген-АГ).

В качестве экспериментальных животных использовали белых крыс обоего пола с массой тела 200-250 г, которым в условиях операционной под кожу в области спины вживляли импланты из пористой алюмооксидной керамики в виде цилиндров диаметром ~ 5 мм и длиной ~ 20 мм. Животные содержались в условиях стационарного вивария ЦНИЛ БелМАПО. Все экспериментальные животные были разделены на 3 группы:

  • 1 опытная группа — 14 крыс, забор материала для исследования осуществляли через 6 суток после операции;
  • 2 опытная группа — 16 крыс, забор материала для исследования осуществляли через 20 суток после операции;
  • контрольная группа — 14 интактных крыс.

По истечении срока наблюдения животных выводили из опыта путем мгновенной декапитации на фоне тиопенталового наркоза. Свежевыделенную селезенку измельчали ножницами и гомогенизировали. Объем гомогената доводили до 10 мл раствором Хенкса. Гомогенат очищали от остатков соединительной ткани: пропускали через фильтр из полиэфирного волокна и центрифугировали при 380 g 10 секунд. После осаждения фрагментов ткани 1 мл супернатанта (суспензии спленоцитов) отбирали в эппендорф и центрифугировали (380 g) 5 минут для осаждения клеток; удаляли супернатант, клеточный осадок дважды отмывали: ресуспендировали в 1 мл раствора Хенкса и вновь осаждали (380 g 5 минут). После второй отмывки клетки вновь ресуспендировали в 1 мл раствора Хенкса. Жизнеспособность клеток определяли методом окраски трипановым синим. Для этого смешивали 10 мкл суспензии клеток и 10 мкл 0,2% раствора трипанового синего. Каплю окрашенной суспензии вводили в камеру Горяева и подсчитывали не менее 100 клеток, считая окрашенные клетки нежизнеспособными.


Результаты

Полученные результаты исследований жизнеспособности спленоцитов у опытных животных 1 и 2 опытных групп в сравнении с результатами контрольной группы представлены в табл. 1.

Динамика жизнеспособности спленоцитов в послеоперационный период

Как видно из табл. 1, показатели жизнеспособности спленоцитов в опытных группах наблюдения не претерпели существенных изменений за время исследования и остались, в сравнении с контрольной группой, в пределах статистической нормы (в 1 опытной группе — 92,0 ± 0,64% и во 2 группе соответственно — 92,6 ± 0,59%). В контрольной группе статистическая норма жизнеспособности спленоцитов составляет 93,4 ± 0,63%. Отсутствие отрицательного влияния имплантов на жизнеспособность спленоцитов свидетельствует о биологической индифферентности пористой алюмооксидной керамики, предложенной для изготовления лакопротезов.

Результаты исследований гиперчувствительности замедленного и немедленного типов к импланту представлены в табл. 2.

Реакция торможения миграции лейкоцитов периферической крови крыс под воздействием вытяжки из импланта

Различие достоверно при p < 0,05, следовательно, достоверных различий между показателями реакций торможения миграции лейкоцитов в контрольных и опытных группах животных не выявлено.

При изучении теста деструкции тучных клеток предварительно проводились контрольные исследования, включающие спонтанную деструкцию, влияние на них антигена, сыворотки крови контрольных и опытных животных. Результаты исследования этого теста показали, что в контроле и опыте реакция тучных клеток на АГ оказалась отрицательной. Это свидетельствует, что имплант не обладает сенсибилизирующими свойствами.


Заключение

Проведенные исследования показали, что лакопротезы, изготовленные из пористой алюмооксидной керамики, не оказывают отрицательного влияния на лимфоциты как основные клетки иммунной системы, о чем свидетельствует отсутствие различий полученных данных между опытными и контрольной группами.

Киттана А. С., Малиновский Г. Ф., Лапуть К. Н. Белорусская медицинская академия последипломного образования, г. Минск.
Опубликовано: «Медицинская панорама» № 9, октябрь 2008.

Наш сайт трудно найти в Яндексе, рекомендуем добавить его в закладки: