Морфофункциональное состояние альвеолярных макрофагов при малоэффективной терапии туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью


В современных условиях формирование множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) микобактерии туберкулеза (МБТ) является одной из главных причин недостаточной эффективности проводимого лечения, развития рецидивов, обострений и прогрессирующих форм туберкулеза. В связи с малоэффективной химиотерапией множественно лекарственно-устойчивого туберкулеза возрастает актуальность изучения особенностей клеточных реакций в очаге туберкулезного воспаления, ведущих к заживлению туберкулеза и восстановлению структурно-функционального гомеостаза.

Цель работы - изучить в эксперименте реакции эффекторов клеточного иммунитета и морфофункциональное состояние макрофагов в очаге воспаления при малоэффективной терапии туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью.

Нами проведены эксперименты на 50 морских свинках - самцах массой 300,0 ± 50,0 г. Животные были рандомно разделены на 3 опытные и 4 контрольные группы.

  • I опытная группа включала 10 животных, зараженных лекарственно-чувствительными штаммами МБТ (лечение 2-мя препаратами: изониазид, рифампицин);
  • II группа - 10 животных, зараженных культурой МБТ с множественной лекарственной устойчивостью: к изониазиду, рифампицину и стрептомицину (лечение 2-мя препаратами: изониазид + рифампицин);
  • III группа - 10 животных, зараженных культурой микобактерий туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью (лечение 4-мя препаратами: изониазид рифампицин, амикацин, офлоксацин);
  • IV группа - 5 животных, зараженных лекарственно-чувствительным штаммом МБТ, не получавших лечение;
  • V группа - 5 животных, зараженных штампами микобактерий туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью, не получавших лечение;
  • VI группа - 5 интактных животных, получавших только противотуберкулезные препараты: изониазид, рифампицин, амикацин, офлоксацин;
  • VII группа - 5 животных - здоровые интактные морские свинки.

Животных заражали подкожно в правую паховую область культурой МБТ Н37RV в дозе 0,025 мг. Лечение животных опытных групп начали через 14 дней после заражения. Химиопрепараты вводили ежедневно в дозах, принятых для экспериментальных животных. Длительность лечения составляла 50 дней (до гибели последнего животного в опытных и контрольных группах). Эффективность лечения оценивали по продолжительности жизни животных, индексу поражения внутренних органов (по 4-балльной системе, предложенной Г. Н. Першиным и А. Н. Тогуновой), индексу высеваемости микобактерий туберкулеза из внутренних органов и бактериоскопическому показателю. У 45 морских свинок исследовали жидкость бронхоальвеолярного лаважа. Под эфирным наркозом вскрывали грудную клетку животных, надрезали трахею и в просвет вставляли канюлю, через которую проводили 8-кратный лаваж одной и той же порции стерильного физиологического раствора в количестве 10 мл, рН = 7,0-7,2, t = 37 °С. После лаважа животное подвергалось эвтаназии. В жидкости бронхоальвеолярного лаважа проводили подсчет общего количества клеток, определяли жизнеспособность альвеолярных макрофагов с трипановым синим. В окрашенных мазках лаважа рассчитывали цитограмму (процентное содержание различных клеточных элементов) и макрофагальную формулу (процентное содержание различных типов макрофагов). Фагоцитарную активность макрофагов оценивали в тесте с суспензией суточной культуры стафилококка.

Продолжительность жизни животных, зараженных МБТ с множественной лекарственной устойчивостью, в группах, получавших и не получавших лечение, была меньше, чем в соответствующих группах с лекарственно-чувствительным возбудителем. У животных, зараженных лекарственно-чувствительными микобактериями туберкулеза, на фоне лечения индекс поражения был значительно меньше (0,29 ± 0,2) по сравнению с группами, где имел место туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью (соответственно 1,0 ± 0,3 и 0,86 ± 0,4). Жизнеспособность альвеолярных макрофагов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа резко уменьшалась у животных, зараженных МЛУ МБТ и не получавших лечение, и оставалась сниженной на фоне применения 2-х препаратов по сравнению с группами животных, зараженных лекарственно-чувствительными МБТ как на фоне лечения, так и без него.

У животных, зараженных микобактериями туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью, особенно без лечения, в макрофагальной формуле преобладали биосинтезирующие макрофаги, доля которых превышала 32,0%. В случае неэффективного лечения МЛУ туберкулеза число биосинтезирующих альвеолярных макрофагов не только не уменьшалось, но даже повышалось (до 42%). Исследование фагоцитарной функции альвеолярных макрофагов выявило резкое снижение фагоцитарного показателя у животных зараженных МЛУ-штаммами, не получавших противотуберкулезные препараты (23,5 ± 8,5 и 51,5 ± 9,7% у здоровых морских свинок). После неэффективного лечения фагоцитарный показатель оставался сниженным (23,1 ± 7,6%) и повысился незначительно у морских свинок, получавших 4 противотуберкулезных препарата (27,7 ± 6,8%). У животных, зараженных лекарственно-чувствительными МБТ, фагоцитарный показатель повысился с 26,5 ± 10,0% в начале лечения до 50,9 ± 6,9% после него.

Таким образом, данные, полученные при изучении экспериментального туберкулеза с МЛУ МБТ, показали, что альвеолярные макрофаги играют важную роль как в защитных, так и в репаративных процессах. При неэффективном лечении МЛУ туберкулеза отмечались изменения популяционного состава альвеолярных макрофагов в сторону увеличения количества молодых, биосинтезирующих, макрофагов, снижения их жизнеспособности и фагоцитарной активности. Выявленные особенности популяций эффекторных клеток иммунитета в жидкости бронхоальвеолярного лаважа могут быть использованы для разработки критериев оценки интенсивности репаративных процессов при туберкулезе с целью оптимизации лечения и методов коррекции местного иммунитета легких.

Суркова Л. К., Дюсьмикеева М. И., Залуцкая О. М., Шпаковская Н. С., Скрягина Е. М.
НИИ пульмонологии и фтизиатрии МЗ РБ.

(Опубликовано в журнале "Медицинская панорама" № 10, ноябрь 2004)

Наш сайт трудно найти в Яндексе, рекомендуем добавить его в закладки: