Методы прямого выявления Chlamydia trachomatis


 

Микробиологическое исследование

Микробиологическое исследование является трудоемким, но наиболее чувствительным для диагностики хламидийной инфекции методом; длительность его в среднем составляет 4-7 дней. Несоблюдение техники взятия биологического материала, условий транспортировки и культивирования может приводить к получению ложноотрицательных результатов.

Выделение возбудителя на культуре клеток, обработанных различными метаболитами, является одним из лучших методов диагностики урогенитального хламидиоза («золотой стандарт»). Для исследования можно использовать различные культуры: Hela L-929, культуру 21 из клеток почек хомячков, куриные эмбрионы, однако, по мнению большинства авторов, лучшей является культура клеток МакКоя, обработанных циклогексимидом для блокирования их деления. При использовании метода Романовского-Гимзы элементарные тельца хламидий окрашиваются в розовый цвет, а ретикулярные - в синий. В люминесцентном микроскопе они имеют ярко-зеленую окраску на красно-коричневом фоне клеток. Выделение возбудителя этим методом указывает на то, что он живой, а это очень важно для контроля лечения и определения чувствительности к антибиотикам.

Достоинства метода
Высокая чувствительность (для диагностики достаточно обнаружения одной клетки с цитоплазматическими включениями) и почти 100%-я специфичность.

Недостатки и ограничения:

  • Метод требует специального оснащения и соответствующей квалификации персонала.
  • Условием получения достоверного результата является полное освобождение материала от сопутствующей бактериальной флоры, предупреждение гибели хламидий при транспортировке, прекращение приема антибиотиков за месяц до исследования.
  • Высокая стоимость, длительность и трудоемкость метода.

Показания для диагностики хламидийной инфекции культуральным методом:

  1. Беременность с отягощенным акушерским анамнезом.
  2. Оценка эффективности антибактериального лечения.
  3. Определение чувствительности к антибактериальным препаратам.
  4. Выявление хламидий у ВИЧ-инфицированных и лиц со вторичными иммунодефицитными состояниями.
  5. Бесплодие неясного генеза.
  6. Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.

 

Цитологический метод

Традиционным методом является исследование мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе или раствором Люголя. Материалом служат мазки, соскобы со слизистой оболочки уретры, цервикального канала (хламидий могут размножаться и персистировать только в цилиндрическом эпителии). Цитологический метод заключается в обнаружении цитоплазматических включений хламидий в эпителиальных клетках препаратов. При окраске по Романовскому-Гимзе цитоплазматические включения видны как округлые или полулунной формы структуры красно-фиолетового (элементарные тельца) и сине-фиолетового (ретикулярные). Цвета при окраске раствором Люголя видны включения красно-коричневого цвета в виде гранулярных масс в клетках, окрашенных в желтый цвет.

Достоинства метода:

  • Технически прост.
  • На просмотр уходит 30-40 мин.

Недостатки и ограничения:

  • Низкая чувствительность.
  • Метод требует специального оснащения и соответствующей квалификации персонала.
  • Могут возникнуть проблемы при взятии материала.
  • Субъективность оценки результатов.
  • Возможность обнаружения псевдовключений (клеточных структур и бактерий), напоминающих включения хламидий.

 

Иммуноцитологический метод

Это один из самых распространенных способов диагностики хламидийной инфекции. Метод иммунофлюоресценции основан на окрашивании мазков биологического материала моноклональными антителами, которые либо непосредственно конъюгированы с флюоресцентным красителем (прямой метод), либо выявляются в мазке вторичными флюоресцин-меченными антителами (непрямой метод). Мазки исследуют под люминесцентным микроскопом, время одного анализа составляет 30-60 мин.

 

Прямая иммунофлюоресценция

ПИФ - это прямое выявление антигенов хламидий. При люминесцентной микроскопии хламидийные включения определяются в виде образований в клетке эпителия с зеленой или желто-зеленой флюоресценцией на коричнево-оранжевом фоне цитоплазмы клеток.

Положительный контроль должен иметь не менее 10 элементарных телец, расположенных внеклеточно и имеющих характерную флюоресценцию.

Достоинства метода:

  • Высокая чувствительность (90-95%) и специфичность (до 98%) (Гранитов В.И., 1999).
  • Быстрое выявление хламидий.
  • Возможность определения возбудителя в небольшом количестве материала.

Недостатки и ограничения:

  • Метод требует специального оснащения и соответствующей квалификации персонала.
  • Могут возникнуть трудности при взятии материала.
  • Субъективность оценки результатов.

 

Определение бактериальных антигенов (иммуноферментный анализ)

В основе этого метода лежит реакция связывания антител со специфическими полисахаридами или белками возбудителями (антигенами). Количественная оценка связывания антител с антигеном возбудителя проводится по степени выраженности цветной реакции. Время выполнение теста - 4-6 часов.

Преимущества метода:

  • Возможность определения не только самих микроорганизмов, но и их растворимых антигенов, которые накапливаются в жидкостях инфицированного организма.
  • Автоматизация и высокая пропускная способность.

 

Методы экспресс-диагностики

Основой экспресс-диагностики хламидийной инфекции является иммунохроматография и ферментоспецифическая реакция. Использование наборов различных фирм для экспресс-диагностики хламидийной инфекции позволяет визуально оценивать результаты через 10-15 мин. Чувствительность методов составляет 50-60%. Эти наборы могут быть использованы для скрининговых исследований.

 

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР-диагностика)

Эта реакция является методом прямого определения специфической последовательности родительской ДНК для копирования (амплификации) с помощью двух коротких фрагментов ДНК (праймеров), которые комплементарны концевым участкам этой последовательности. Затем происходит удлинение последовательности ДНК за счет имеющихся в реакционной смеси в избытке дезоксинуклеозидтрифосфатов. В результате этого процесса происходит образование ампликонов копии обнаруженной последовательности ДНК. Ампликоны выявляют посредством электрофореза в агарозе. Наличие специфического фрагмента ДНК определяют с помощью контрольной ДНК исследуемого возбудителя, амплифицированной одновременно с клиническими образцами.

Достоинства метода:

  • Уникальная видовая специфичность и чувствительность (до 10 молекул ДНК).

Недостатки и ограничения:

  • Высокая стоимость.
  • Метод требует специального оснащения и соответствующей квалификации персонала.
  • Большой риск загрязнения образцов продуктами амплификации при несоблюдении протокола исследования.

=================
Вы читаете тему:
Современный алгоритм диагностики хламидийной инфекции

1. Chlamydia trachomatis и ее роль в заболеваниях урогенитального тракта.
2. Методы прямого выявления Chlamydia trachomatis.
3. Методы непрямого выявления Chlamydia trachomatis.

Смирнова Т. А., Покатович O. K. БГМУ.
Опубликовано: "Медицинская панорама" № 8, сентябрь 2004.

Наш сайт трудно найти в Яндексе, рекомендуем добавить его в закладки: